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《动物细胞或组织基因组DNA提取试剂盒》(无苯酚和氯仿)

【Genomic DNA Isolation Kit of Animal Cells or Tissue】

使用说明书(版本OL12)

货号

GD101

规格

100 次

运输和储存

该产品在常温下运输和保存,保存期1年。

产品用途

该产品可用于提取动物细胞或组织的基因组DNA,提取的基因组DNA可用于常规的PCR扩增、Southern杂交、文库构建等应用。

产品优点

1. 整个基因组DNA的提取过程,无需使用有毒的苯酚和氯仿。

2. 由于基因组DNA的提取过程不需要使用离心吸附柱,提取的基因组DNA片段较大,非常适合用于长片段PCR的扩增、Southern杂交、文库构建等应用。

试剂盒组成

1. 细胞裂解液:50 mL

2. 蛋白沉淀液:10 mL

 注意:以下试剂需要自己准备:(1)20 mg/mL蛋白酶K(溶于水,-20 ℃保存);(2)异丙醇;(3)75% 乙醇;(4)TE 溶液(1 mM EDTA, 10 mM Tris-HCl, pH 8.0)。

提取步骤:

1. 细胞或组织的裂解和消化:

(1) 细胞:取100-1000万个细胞(如果是贴壁细胞,请先用胰酶消化)在1.5 mL离心管内,在普通台式离心机上,1500 rpm(约200 g),离心5 分钟。弃上清,往细胞沉淀中加入500μL细胞裂解液,再加入 5μL蛋白酶K(20 mg/mL),用1 mL的吸头将细胞沉淀缓慢吹散,50 ℃消化3小时。

(2) 组织:取哺乳动物组织大约20-50 mg(比如,可以是1-2个小鼠的脚趾或3-5 mm的鼠尾),用剪刀将组织尽量剪碎,加入500μL细胞裂解液,再加入 5μL(20 mg/mL),50 ℃消化过夜,至组织被消化完全为止。

注意A:上述细胞或者组织在50 ℃消化期间,如果有条件,最好能放在摇床上不停震荡。如果不能,请每隔一段时间,上下颠倒离心管8-10次,以帮助消化。

注意B:在处理组织的过程中,请勿交叉污染。在处理完一个组织样品后,用含有75% 乙醇的棉球擦拭剪刀,并在火上烧灼后,再处理下一个组织样品。

注意C:如果组织经蛋白酶K消化过夜,仍然未消化完全,可以再加入适量的蛋白酶K,继续消化,至组织被消化完全为止。


2. 消化完毕后,将含有细胞或组织裂解液的离心管放室温,加入100 μL的蛋白沉淀液,盖上盖子,上下颠倒离心管8-10次,冰浴10 min。


3. 将离心管放入普通台式离心机上,13000 rpm,离心5 分钟,上清移至新的离心管,弃沉淀。

注意:吸取上清时,勿接触到底层的蛋白质沉淀。


4. 加入等体积的异丙醇,室温放置5 min,13000 rpm,离心5 分钟,弃上清,此时,管底可见白色DNA沉淀。


5. 加入1 mL 75% 乙醇溶液,上下颠倒离心管以洗涤沉淀,13000 rpm,离心5 分钟,用1 mL吸头将上清吸走并丢弃。

注意:勿将沉淀吸走。


6. 再次13000 rpm,离心30秒,用200 μL吸头,将管底的剩余液体吸干净并丢弃。


7. 将含DNA沉淀的离心管放入50°C烘箱中干燥10 分钟,干燥后沉淀呈透明状。

注意:此步骤的目的是让乙醇彻底挥发干净。


8. 用100 μL TE溶解DNA沉淀,放入50°C水浴加热30 分钟,以帮助基因组DNA的溶解(如有必要,可以用剪去尖端的200 μL吸头缓慢吹吸DNA溶液,以进一步帮助基因组DNA的溶解)。


9. 将提取好的基因组DNA放-20 ℃保存备用。至此,提取的细胞或组织的基因组DNA可用于后续的相关实验。