​上海易色医疗科技有限公司

Shanghai Yise Medical Technology Co.,Ltd.


易色——色彩让基因检测更容易!


本公司招牌产品 【三款细胞培养用快速《支原体检测试剂盒》(点击进入)】 之一


细胞《一步法恒温支原体检测试剂盒》详细介绍

 一、《一步法恒温支原体检测试剂盒》主要用途​​

《一步法恒温支原体检​测试剂盒》主要用于检测细胞培养上清或别的液体样品(如血清)中是否含有支原体污染,该试剂盒仅用于基础科研。目前,该试剂盒已经大规模上市销售,是本公司的拳头产品。


 二、《一步法恒温支原体检测试剂盒》扩增原理​​


《一步法恒温支原体检测试剂盒》完全基于本团队自有知识产权技术“重组依赖的核酸滚环扩增方法(RD-RCA”开发而成。

 


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 三、《一步法恒温支原体检测试剂盒》八大优点​​


《一步法恒温支原体检测试剂盒》八大优点 


​(1) 极端方便,整个检测过程只需一步即可完成

(2) 极端省时,整个检测过程只需1小时,而PCR法通常需要2-4小时。时间就是金钱,请把您宝贵的时间花在真正的科学研究上,支原体检测这点破事就交给我们来完成吧。

(3)极端灵敏,比普通PCR灵敏1-3个数量级

(4)无需样品的前处理。由于细胞培养数天后,培养液中经常含有严重抑制PCR扩增的代谢物,所以样品的前处理一般是PCR法不可或缺的环节。而RD-RCA扩增不受抑制,无需样品的前处理。

(5)无需样品的离心浓缩,检测只需1微升培养液即可。

(6)无需用到PCR仪、电泳槽、凝胶成像仪、离心机等仪器,整个检测只需一个水浴锅即可完成。

(7)无需电泳,无需接触EB等诱癌物质。根据反应管的指示剂,肉眼即可判断反应结果

(8)产品稳定性极好,可以在室温至少放置2个月-20 ℃至少可以放置2年。

 四、 RD-RCA法与PCR法的主要技术指标对比​​
 五、 《一步法恒温支原体检测试剂盒》法与PCR法的灵敏度和抗干扰性比较​​
细胞支原体污染的灵敏度测试

 

将有支原体污染的细胞培养液上清用水做系列稀释(RD-RCA做10倍系列稀释、PCR做5倍系列稀释),而后分别用《一步法恒温支原体检测试剂盒》和普通PCR进行支原体检测。

    ​如右图所示,采用RD-RCA法的《一步法恒温支原体检测试剂盒》在稀释10000倍后仍呈明显的阳性而普通PCR(30 cycles)在稀释125倍后呈勉强的弱阳性,二者灵敏度至少相差80倍

    另外一个值得高度注意的是:用细胞培养上清原液进行PCR检测居然呈明显的阴性!而原液用水稀释5倍后,PCR却呈阳性。说明:细胞培养上清原液含有强烈抑制PCR的代谢物

    与此形成鲜明对比的是:采用RD-RCA法的《一步法恒温支原体检测试剂盒》却能在细胞培养上清原液中检测出支原体污染!说明:同样的代谢产物虽然强烈抑制PCR却不会抑制RD-RCA的正常扩增

    这是RD-RCA法的巨大优势!如此,RD-RCA就不需要进行样品的稀释或者进行支原体DNA的抽提等的前处理。



特别提醒:

   该实验也说明:如果使用的PCR法支原体检测试剂盒没有内参对照,而直接使用细胞培​​养上清原液进行PCR检测,检测结果即使为阴性,也不能说明其没有支原体污染,极有可能是PCR的扩增被细胞的代谢产物抑制了!这个问题绝大部分进行支原体检测的人员都不会注意,这是利用无内参对照的PCR法进行支原体检测的致命弱点!

【注:由于本公司现在生产的《PCR法支原体检测试剂盒》(货号:PM008),含内参对照,已经可以区分真阴性样品(样品无支原体污染。电泳结果:有内参条带,无支原体特异条带)假阴性样品(PCR被代谢产物抑制。电泳结果:内参条带和支原体特异条带都没有)。详情请参考本公司生产的PCR法支原体检测试剂盒》说明书


  有关PCR的扩增会被细胞的代谢产物抑制的问题,Sigma公司的LookOut Mycoplasma PCR Detection Kit(货号MP0035-1 kit)的PCR法支原体检测试剂盒说明书中也特别提到了这点,其强烈建议用试剂盒进行DNA提取后再进行鉴定。可见这是利用PCR法进行支原体检测过程中普遍遇到的问题,应该引起科研工作者的高度重视!否则,由此引起的假阴性(培养时间越久,概率越高),将使无内参对照PCR法进行的支原体检测变得毫无意义!
  而如果采用稀释后再进行PCR检测,由于PCR的灵敏度有限,轻度的支原体污染经稀释后极有可能检测不出来!

  所有上述问题,采用RD-RCA法的《一步法恒温支原体检测试剂盒》都不存在!(1)RD-RCA的扩增不会被细胞的代谢产物抑制,完全可以使用细胞上清原液进行检测;(2)RD-RCA的灵敏度是PCR的10-1000倍,非常轻微的支原体污染就可以检测出来。此时,轻度支原体污染的细胞可以采取化学试剂将支原体消灭,从而挽救宝贵的细胞。
 六、 《一步法恒温支原体检测试剂盒》产品形式

 

 

本公司所有恒温基因检测产品全部以冻干品的形式提供(如右图所示)。《一步法恒温支原体检测试剂盒》同样以冻干品的形式提供。


采用最先进的冻干技术,将所有扩增成分都冻干在一个0.2 mL的PCR管中,使用时只需加入水化液和待测样品,整个检测过程一步即可完成非常简单。


此外,由于冻干品的稳定性非常好,可以在室温保存至少2个月,这样非常方便运输和储存,也非常适合在野外或者污染点进行即时检测。该工艺的创新极大的扩展了相关产品的市场应用前景。



 


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《一步法恒温支原体检测试剂盒》的冻干品
 七、《一步法恒温支原体检测试剂盒》说明书 (PDF版本说明书,请到本网站“下载中心”页面下载)​​

细胞培养专用《一步法恒温支原体检测试剂盒》(溶液型)

使用说明书 (181209)



注意:PDF版说明书,请到本公司网站“下载中心”页面下载!(冻干型产品暂停供应)

货号

      MD001

储存条件
     
      该产品随冰袋运输,收到产品后请立即放-20 ℃冰箱保存,该条件下,至少3年内仍然有活性。


产品用途

      《一步恒温法支原体检测试剂盒》主要用于检测细胞培养液或别的液体样品(如血清等)中是否含有支原体。本产品仅用于基础研究。

产品简介

      哺乳动物细胞的培养,支原体(Mycoplasma)污染是个世界性的问题。支原体污染几乎可以改变细胞的所有参数,导致实验结果的不准确、甚至完全错误(支原体污染对细胞的详细危害,请参考本公司的网站:www.yisemed.com)。从2013年开始,《Nature》期刊已正式要求投稿的文章,如涉及细胞培养都要进行支原体检测。相信会有越来越多的高水平期刊将做出同样的支原体检测要求。
培养法是相对可靠的支原体检测技术,但是该方法非常耗时的,需要数周,不适合作为细胞培养液中支原体污染的快速检测。此外,通过固体培养法无法检测污染细胞的一种最常见的支原体,即猪鼻支原体(M.Hyorhinis)。这是因为猪鼻支原体无法在支原体固体培养基上形成可见的菌落。而猪鼻支原体约占所有支原体污染的20-50%。
有的实验室使用荧光染色法检测支原体,但是该方法灵敏度太低,而且严重依赖实验人员的经验,实验的稳定性极差。此外,当该方法检测成阳性时,细胞经常已经严重污染。
目前,细胞培养液中支原体污染的检测通常使用的是PCR法。但是PCR法也有明显的缺点:(1)整个过程大约需要3个小时;(2)由于细胞培养数天后,培养液中经常含有严重抑制PCR扩增的代谢物,所以样品的前处理一般是PCR法不可或缺的环节;(3)PCR法的灵敏度有限,通常需要将培养液离心浓缩或者抽提DNA后再检测;(4)PCR产物的电泳,需要用到EB等潜在的致癌物质;(5)需要用到PCR仪、电泳槽、凝胶成像仪、离心机等仪器。
      《一步法恒温支原体检测试剂盒》使用独特的恒温基因扩增技术,彻底解决了上述PCR法的缺点:(1)整个检测过程只需1小时,大大缩短了检测时间;(2)细胞培养液中的PCR抑制剂,不会抑制该产品的恒温基因扩增,所以任何情况下都无需样品的前处理;(3)恒温基因扩增的灵敏度是PCR法的10-1000倍,检测只需使用1 μL的细胞培养液,无需样品的离心浓缩或者进行支原体DNA的抽提;(4)恒温基因扩增的产物无需电泳,可以通过指示剂的颜色变化直接肉眼判断反应结果;(5)无需用到PCR仪、电泳槽、凝胶成像仪、离心机等仪器,整个检测过程只需一个水浴锅。
      经测试,本试剂盒至少可以检测以下13种支原体:(1)M.Hyorhinis、(2)M.Fermentans、(3)M.Arginini、(4)M. hominis、(5)M. orale、(6)M. salivarium、(7)M.pirum、(8)Acholeplasma Laidlawii、(9)M. agalactiae、(10)M.bovis、(11)M. buccale、(12)M. arthritidis、(13)M. pulmonis(注:M.为Mycoplasma的缩写)。其中,前8种为是最常见的污染细胞的支原体种类,约占污染细胞的支原体的98%左右。以上13种约占污染细胞的支原体种类的99%左右。
      注意:本试剂盒无法检测Ureaplasma Urealyticum支原体(注:该支原体污染细胞的概率极低)!
      如果您想得到100%正确的支原体检测结果(比如,开展细胞治疗的客户,进行干细胞培养的客户,生产血清、胰酶、培养液的客户,出售各种原代培养细胞系和肿瘤细胞系的客户等),任选本公司生产的《一步法恒温支原体检测试剂盒》、《PCR法支原体检测试剂盒》和《发光法支原体检测试剂盒》中的两种进行检测,将会得到比较满意的结果,检测的正确率应该在99.9%左右。如果同时使用这三种试剂盒进行检测,检测的正确率应该在99.99%左右。
      如果将所有待测样品统一接种到支原体液体培养基,然后在37℃培养箱中培养3天后,再用本公司三种支原体检测试剂盒同时进行检测,则基本可以确保您的检测结果100%正确。 通过将待测样品接种到支原体液体培养基培养3天的目的是:防止一些支原体含量极其微量的待测样品(比如:细胞培养用的血清、胰酶、抗生素、培养液和极个别的细胞培养上清),如果不经过大量繁殖,有可能漏检。

试剂盒组成

(1)溶液1:1150 μL (50次检测);
(2)溶液2:50 μL(50次检测);
(3)溶液3:25 μL;
(4)阳性支原体DNA:50 μL;    
(5)矿物油:1500 μL。
      需要自己准备的耗材:0.2 mL透明度良好的薄壁平盖PCR管(比如:QSP品牌,货号:431-Q;如果觉得进口品牌太贵,每包1000个,10元左右的国产薄壁平盖0.2 mL PCR管也能满足实验要求);

检测过程
1.    待测样品的准备:为了准确判断细胞是否有支原体的污染,待测的细胞培养液样品最好来源于至少培养2天(最好3天)且汇合度在70-90%左右的细胞培养上清(贴壁细胞),无需离心。悬浮培养的细胞也需要在换液传代后,至少让细胞生长2天(最好3天)再取培养液进行检测,也无需离心。哺乳动物细胞的存在不会影响检测结果。
      注:收集的待测细胞培养液样品如果不立即检测,请放于-20℃或-80℃冰箱保存,不得放于室温或4℃冰箱。样品在-20℃至少可以保存一个月,在-80℃可以长期保存。此外,为了节约检测成本,可以将不同时间收集的样品放于-20℃或-80℃冰箱保存,而后一起检测。

2.    反应体系的配制(操作之前,请认真看完后文的注意事项后,再进行操作。):

  具体操作步骤,请去本网站“下载中心”页面下载PDF版说明书。

3.    反应:
选择以下方式之一进行反应:
(1)水浴内反应(注意:本产品不能在金属水浴内反应!):往每个反应管内加入25 μL矿物油,以防止水份挥发,盖上盖子,将反应管插入带孔的漂板内,放入已经升温到61℃的水浴内,准确反应60分钟。
      注:在反应之前,水浴锅必须先升温到61℃,再放入反应管。此外,必须用水银温度计测量水温,确保水浴锅的温度准确。本试剂盒所用的酶对温度非常敏感,只允许仪器显示温度与实际温度的温差不超过1℃。

(2)PCR仪上反应:有PCR仪的实验室,强烈建议在PCR仪上进行反应,这样可以准确控制反应的时间和温度。PCR仪参数如下:61℃,60 min;10℃, forever;热盖温度,100 ℃。
      注:在带热盖的PCR仪上进行反应,无需在反应管内加入矿物油。

4.    结果判断:61℃反应60分钟后,立刻取出反应管,放于室温。以一张白纸或白色泡沫盒(优选白色泡沫)为背景,通过反应管溶液颜色的变化,即可判断检测结果。如果溶液为蓝绿色,则说明有支原体污染;如果为紫红色,则说明没有支原体污染(如图1)。
      注1:在61℃反应的时间必须准确计时,超过说明书规定的反应时间可能会出现假阳性(最多不得超过5分钟)。如果试剂盒已经过期或者发生其他意外情况影响酶活性时,万一发现:61℃反应60分钟后,阳性和阴性颜色区别不明显,可以考虑将已经反应60分钟的反应管,继续在61℃的水浴或PCR仪上反应10分钟。但是如果61℃反应60分钟后,阳性与阴性的区别一眼就可以看出,不得继续反应,否则可能出现假阳性。以上只是意外情况下的补救措施。
       注2:如果反应后,发现个别样品的颜色介于阳性和阴性之间,可以将这些样品继续61℃反应10分钟。10分钟后,如果其颜色仍然与阳性对照的颜色不同,该样品应该判为阴性。这种可疑样品建议用相同试剂盒或者不同原理的其他试剂盒(如本公司的PCR法支原体检测试剂盒或者发光法支原体检测试剂盒)进行复检。
      注3:反应后,请勿打开反应管的盖子,否则有可能造成检测环境的污染。结果判断完后,将其用自封袋密闭,扔到另外一个房间的垃圾桶内。

      注4:不同批次的产品,以及由于拍照等原因,反应后阳性对照和阴性对照的颜色可能会与本说明书书图1的颜色略有差异(比如阴性对照颜色可能呈现浅红色或紫红色)。只要反应后阳性对照与阴性对照的颜色有显著区别,就说明反应成功。




















 

图1. 左边为阴性反应结果,右边为阳性反应结果。



注意事项
1.    请确保样品加入后,反应之前:阴性、阳性和所有待测样品的颜色基本一致。如果个别样品,一旦加入,反应管的颜色就与阴性、阳性明显不同,说明其中含有可干扰本系统正常指示效果的物质,必须先去除。此现象曾经在检测CHO无血清培养基上发生过。常见的DMEM、MEM、F12、1640等培养基不会发生该现象。去除方法:取1 mL细胞上清,先13000 rpm离心5 min,吸走950 μL上清;加PBS 950 μL,再次离心,吸走950 μL上清;再加PBS 950 μL,第三次离心,吸走950 μL上清;吹匀剩余的50 μL,取1 μL进行检测。
2.    由于恒温扩增所用的各种酶强烈依赖溶液中的二价离子,待测样品的EDTA等金属离子螯合剂只能微量存在。本试剂盒建议直接使用细胞上清进行检测,不建议提取支原体DNA。如果打算用试剂盒提取支原体DNA,请用去离子水溶解DNA。
3.    防DNA污染注意事项:
(1)强烈建议使用滤芯吸头(比如Axygen滤芯吸头)吸取相关溶液和阳性支原体等。如果没有滤芯吸头,至少应该使用新开封的吸头。注意:如果因为没有使用滤芯吸头进行操作,而导致整管溶液被污染,更换产品时,我们将收取50%的费用。如果使用滤芯吸头仍然发生此情况,我们将完全免费更换。
(2)必须确保使用的移液枪本身没有残留的支原体。因此,最好使用全新购买的移液枪。如果没有新购买的移液枪,至少应该使用以前没有进行过细胞培养的移液枪。因为进行过细胞培养的移液枪极有可能被含支原体的培养液污染(如细胞培养时,不小心将含支原体污染的培养液吸入移液枪的枪体内)。由于本试剂盒非常灵敏,移液枪中吸附的支原体有可能造成不必要的假阳性。
(3)样品前处理的各类吸头、离心管,以及吸取阳性对照DNA、待测样品DNA的吸头,务必小心处理,请将其装入含有半瓶水的带盖的、可密封的瓶子内,全部样品吸取完后,盖上瓶盖,以防止阳性DNA的挥发,造成环境的污染,进而造成假阳性。
(4)整个操作过程,最好不要说话,因为人的口腔和唾液都是带支原体的。
4.    如发现细胞被支原体污染,本公司提供细胞专用支原体清除试剂。
5.    血清的支原体检测有特殊性,请参考本公司《发光法支原体检测试剂盒》说明书中最后的注意事项部分。

《一步法恒温支原体检测试剂盒》的反应结果
 八、检测成本对比



假设以下两种方法每次都只检测1个样品,其各自总成本如下:


方法1:《一步法恒温支原体检测试剂盒》:36.1元/次检测。

(1)试剂成本,一次检测只需16元人民币。

(2)仪器成本:一个普通水浴锅,约200元,假设仪器可以使用2000次,则平摊到每次检测约0.1元/次。

(3)时间成本:1小时,按上海小时最低工资标准,折合人民币17元。

三项成本总计:33.1元/次检测。


方法2:PCR法:151-460元/次检测。

(1)试剂成本:购买商用试剂盒,以Sigma公司的​​​LookOut® Mycoplasma PCR Detection Kit(货号MP0035-1 kit)为例,2014年目录价为3469元/24次检测,每次检测约需145元。国内品牌的普通PCR法支原体检测试剂盒,每次检测也普遍需要30-50元。

(2)样品的前处理:如使用DNA提取试剂盒提取支原体DNA,大约需要10-20元/样品。

(3)仪器成本:普通PCR需要配套PCR仪、电泳槽、电泳仪、紫外拍照仪;定量PCR则需要定量PCR。仪器总费用在10-50万。假设仪器可以使用2000次,则平摊到每次检测约50-250元。

(4)时间成本:约3小时。按上海小时最低工资标准,折合人民币51元

(5)电泳成本:琼脂糖约5-10元/块(普通PCR)。

五项成本总计:151-460元/次检测。

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 九、支原体污染细胞的具体危害(附:实验结果和参考文献)

 

1.       细胞生物学:支原体污染将直接导致最常用的MTT细胞毒性实验结果的严重错误

 

  •  结果:由于支原体对MTT的额外还原作用,对阿霉素(Doxorubicin, 一种抗肿瘤药物)的抗性,支原体污染和非污染的细胞二者相差15!(Due to an additional reduction of tetrazolium by mycoplasmas, contaminated cells appeared up to 15 fold resistant to doxorubicin.
  • 参考文献:Falsification of tetrazolium dye (MTT) based cytotoxicity assay results due to mycoplasma contamination of cell cultures. Anticancer Res. 1999 Mar-Apr; 19(2A):1245-8.

 

2.       免疫学:支原体污染本身将可以直接诱导树突状细胞的成熟!这对于目前国内外普遍开展的人体免疫细胞的肿瘤治疗将是灾难性的

 

  •   结果:(1The capacity of these cell lines to induce DC maturation was due to their contamination by mycoplasma. Our results reveal that DC are able to sense mycoplasma infection and mature as they do in response to most viruses and bacteria. 2Further investigation demonstrated that the changes in DC phenotype and functions were due to the presence of mycoplasmas in these two cell lines; eradication of mycoplasmas completely abolished the observed effects, and importantly, pure mycoplasmas in the absence of tumor cell supernatants were able to produce the same effects.
  • 参考文献:(1Dendritic cell maturation is induced by mycoplasma infection but not by necrotic cells. Eur. J. Immunol. 2000. 30: 705–708。(2Mycoplasma-mediated alterations of in vitro generation and functions of human dendritic cells. J Biomed Sci. 2005;12(1):31-46.

 

3.       神经生物学:支原体污染本身可以直接降解淀粉样多肽Amyloid-beta (Abeta)

 

  • 结果:These data show that mycoplasmas degrade Abeta and thus may represent a significant source of variability when comparing extracellular Abeta levels in different cell lines.
  • 参考文献:(1Amyloid-beta peptide degradation in cell cultures by mycoplasma contaminants. BMC Res Notes. 2008 Jun 30;1:38. 2Neuroprotective effects of Mycoplasma hyorhinis against amyloid-β-peptide toxicity in SH-SY5Y human neuroblastoma cells are mediated by calpastatin upregulation in the mycoplasma-infected cells. Neurochem Int. 2011 Mar;58(4):497-503.

 

4.       生物化学:支原体污染可以直接影响L-arginine的代谢


  • 结果:This demonstrates that infection with M. hyorhinis leads to different effects on gene regulation of the murine and human iNOS gene. Our study underlines the importance of routine checking of cell cultures for mycoplasma contamination, particularly in studies on NO-mediated effects or inflammatory processes.
  • 参考文献: Impact of Mycoplasma hyorhinis infection on L-arginine metabolism: differential regulation of the human and murine iNOS gene. Biol Chem. 2005 Oct;386(10):1055-63.

 

5.       病理学:支原体污染可以直接刺激前列腺素E2Prostaglandin E2)的产生

 

  • 结果:Mycoplasma fermentans (MF) also stimulated PGE(2) production. The co-infection of mycoplasma and Chlamydia resulted in an additive effect in the production of PGE(2). Thus it is important to use host cells and Chlamydia free of mycoplasma contamination for the analysis of Chlamydia-induced prostaglandin production.
  • 参考文献:Production of prostaglandin E2 in monocytes stimulated in vitro by Chlamydia trachomatis, Chlamydophila pneumoniae, and Mycoplasma fermentans. Microb Pathog. 2004 Sep;37(3):155-61.


6. 基因的表达与调控:支原体污染可以显著改变数百个基因的表达水平


  • 结果:支原体污染后与无污染的同一细胞系相比,表达差异达2倍以上的基因就有200多个(Even so, more than 200 genes were identified as being up- or down-regulated, demonstrating that mycoplasma infection has a profound effect on gene expression patterns.)。有些基因的表达甚至相差十几倍!(A variety of pathways are af­fected, and both up-regulation (up to 10-fold) and down-regulation (up to 12-fold) were seen.
  • 参考文献: Miller CJ, Kassem HS, Pepper SD, Hey Y, Ward TH, Margison GP. Mycoplasma infection significantly alters microarray gene expression profiles. Biotechniques. 2003 Oct;35(4):812-4.



 

 十、如何获得100%正确的支原体检测结果?



             可以说,到目前为止,针对体外细胞培养的支原体检测的方法还没有一种单独使用就可以保证100%正确,既不会漏检(假阴性),也不会多检(假阳性)。

(1)支原体固体培养法。通过固体培养法无法检测污染细胞的一种最常见的支原体,即猪鼻支原体(M.Hyorhinis)。这是因为猪鼻支原体无法在支原体固体培养基上形成可见的菌落,而猪鼻支原体约占所有支原体污染的20-50%。这就意味支原体固体培养法漏检率高达20-50%。

(2)PCR法。PCR法导致的假阳性大家比较熟悉,无需多说。值得注意的是,由于细胞培养液中,经常会含有强烈抑制PCR扩增的代谢产物,如果不进行样品的前处理而直接使用细胞培养原液进行PCR检测,产生假阴性的概率是非常大的。

(3)荧光染色法。由于该方法本身的灵敏度较低,轻度的支原体污染往往无法检测出来。该方法漏检率也不会低。

(4)检测支原体特异性酶的方法,比如Lonza公司的MycoAlert Plus Mycoplasma Detection Kit和本公司生产的《发光法支原体检测试剂盒》。主要缺点是发光值有一定的波动,处于检测下限边缘的读值可能会造成误判。

(5)《一步法恒温支原体检测试剂盒》该方法尽管有许多优点,但是目前为止,我们只能保证该试剂盒能检测出说明书上列举的13种支原体,虽然这13种支原体大约占了所有污染细胞的支原体种类的99%左右,但是该方法也不能保证100%的支原体检出率。


       综上所述,单独使用目前市面上的任何一种支原体检测试剂盒,都无法做到100%正确,既不会漏检(假阴性),也不会多检(假阳性)。严格的支原体检测,至少需要使用两种,最好使用三种不同原理的支原体检测方法同时进行检测,才能使检测结果接近100%正确。


  如果您想得到100%正确的支原体检测结果(比如,开展细胞治疗的客户,进行干细胞培养的客户,生产血清、胰酶、培养液的客户,出售各种原代培养细胞系和肿瘤细胞系的客户等),任选本公司生产的一步法恒温支原体检测试剂盒》、《PCR法支原体检测试剂盒》和《发光法支原体检测试剂盒中的两种进行检测,将会得到比较满意的结果,检测的正确率应该在99.9%以上。如果同时使用这三种试剂盒进行检测,检测的正确率应该在99.99%以上。


  一步法恒温支原体检测试剂盒》、《PCR法支原体检测试剂盒》和《发光法支原体检测试剂盒》每种方法各有优点和缺点,具体如何选择,请参考如下网页:



本公司三款《支原体检测试剂盒》选购指南(点击左侧进入

 十一、郑重承诺

 

郑重承诺

 

本公司向所有客户郑重承诺:

 

一、本网页所列举的实验数据和结果均是真实、可靠的!

 

二、如果有客户发现《一步法恒温支原体检测试剂盒》存在以下任何问题,本公司将全额退款

 

(1)《一步法恒温支原体检测试剂盒》的灵敏度不如普通PCR(30 cycles)。

(2)《一步法恒温支原体检测试剂盒》会被细胞的代谢产物抑制。

(3)《一步法恒温支原体检测试剂盒》无法识别说明书中列举的13种支原体中的任何一种。

 

 

三、本公司产品,如有质量问题,一律免费更换。

 十二、产品价格


产品名称:《一步法恒温支原体检测试剂盒》;货号:MD001;价格:800元/50次,平均每个样品16元。

 


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《一步法恒温支原体检测试剂盒》第三方学术机构使用后发表的文章
《一步法恒温支原体检测试剂盒》第三方学术机构使用后发表的文章



《一步法恒温支原体检测试剂盒》购买注意事项



(1)《一步法恒温支原体检测试剂盒》是利用本公司自有知识产权的恒温扩增技术,即“重组依赖的核酸滚环扩增方法(RD-RCA”开发而成。本公司具有完全的知识产权!具体的扩增方法,我们网站有详细的介绍。


(2)现在已经开发的恒温扩增技术有近10种之多。目前为止,只有我们公司开发的RD-RCA技术,经严格测试,利用该技术开发出的细胞支原体检测产品(即:本公司的《一步法恒温支原体检测试剂盒》不会被细胞的代谢产物所抑制(具体实验结果,请见本页面开头的“灵敏度比较和抗干扰性比较”实验。)。其他的恒温扩增技术开发的支原体检测产品是否会被细胞代谢产物所抑制并没有任何的报道。

由于细胞代谢产物抑制基因扩增导致的“假阴性”是利用基因扩增方法检测细胞支原体的最大缺点(比如PCR法、或者除RD-RCA外的其他恒温基因扩增技术),所以大家购买时,最好购买经严格测试不会被细胞代谢产物抑制的恒温支原体检测产品。


(3)我们公司基于“RD-RCA技术”开发《一步法恒温支原体检测试剂盒》可以保证比PCR检测(30 cycles)更灵敏。别的恒温基因扩增技术是否具有同样的灵敏度,需要广大科研人员自己去鉴别。


(4)我们的《一步法恒温支原体检测试剂盒》可以保证识别说明说中列举的13种支原体,其约占细胞支原体污染的99%左右。我们郑重承诺:如果有客户发现无法识别其中的任何一种,我们可以全额退款!


(5)我们为恒温扩增开发的显色技术,阳性和阴性的区别非常明显。阳性呈典型的蓝绿色(蓝中带绿,以绿为主),阴性呈粉红色或者紫红色,一眼就可以看出区别。


(6)我们的《一步法恒温支原体检测试剂盒》已经通过第三方学术机构的测试,并有公开发表的文献,可靠性和权威性毋庸置疑。


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