​上海易色医疗科技有限公司

Shanghai Yise Medical Technology Co.,Ltd.


Western Blot专用自发光Marker

使用说明书(版本PK29


产品亮点

Western Blot专用自发光Marker》作用:(1)提供精确的分子量标准;(2)用于监控一抗、二抗和ECL过程;(3)目的条带大小ECL后可以直接比较。


货号

       产品名称

货号

规格

价格

Western Blot专用自发光Marker

LU205-100

0.5 mL自发光Marker (100)

¥400

Western Blot专用自发光Marker

Lu205-500

5x0.5 mL自发光Marker (500)

¥1800


储存条件

本产品在-20 ℃可保存至少3年。


产品原理

Western Blot专用自发光Marker》含有6个纯化的蛋白质,均含有可被小鼠、兔子和山羊等各类抗体识别的基团,当进行化学发光(ECL)检测时,6个蛋白质由于结合了相应的抗体,也可以发光,从而达到自发光的效果。

自发光Marker发出的光与目的蛋白质条带发的光一样,可以通过X-光胶片曝光或者ECL发光成像仪进行检测。《自发光Marker》可以为Western Blot提供精确的分子量标准(注:6个蛋白质中的5个都经过质谱的鉴定),也可用于监控一抗、二抗和ECL过程。


产品组成

《自发光Marker》:500 μL,含6个可自发光的蛋白质,分子量从23 – 117 kDa


产品优点

Western Blot专用自发光Marker》可以为Western Blot提供精确的分子量标准(注:6个蛋白质中的5个都经过质谱的鉴定,为精确分子量),用于监控一抗、二抗和ECL过程。

注:传统预染蛋白质Marker的由于经过了化学修饰的过程,其分子量是不精确的,其误差有可能达到好几个kDa,而自发光Marker由于没有经过化学染色的过程,其分子量是精确的。


使用方法

1.        《自发光Marker》室温融化后可以在SDS-PAGE胶中直接上样。

2.        《自发光Marker》的使用量,一般上5 μL即可。如有必要,也可根据您使用胶的厚度、上样孔的宽度、一抗和二抗的种类、滴度以及ECL液的灵敏度等相关因素进行适当的调整,一般在2-10 μL之间。

       注:(1ECL液建议使用本公司的《超敏ECL发光液》,使用该ECL液,《自发光Marker》的使用量2 μL就足够。经比较测试:本公司的《超敏ECL发光液》在灵敏度和发光的稳定性方面都比目前市面上大量使用的Millipore ECL液(货号:WBKLS0500)更灵敏和更稳定,价格却更便宜,还可以大大节省自发光Marker和一抗、二抗的用量。详情请见本公司《超敏ECL发光液》说明书。(2)《自发光Marker》上样量过大时可能会有微弱的杂带,可以通过减少上样量来解决。

3.        《自发光Marker》可以与本公司或者别的公司的《预染Marker》一起使用,更有利于全程监控Western Blot所有环节。

         注:(1)《自发光Marker》和《预染Marker》根据您的喜好,即可以分开来上样,也可以在同一个泳道上两种Marker

2 如果同一个泳道上两种Marker时,最好先将两种Marker在离心管中匀混后,再上样,如此操作,Marker的条带会更漂亮。

4.        转膜后,进行正常的封闭、一抗和二抗孵育,最后进行ECL发光检测。

5.        ECL后,可以同时检测到6个自发光条带和目的条带(如图1B所示)。目的条带的大小一目了然。


产品效果






























1. 《双色预染Marker 和自发光Marker套装》实验效果图。(A)《双色预染Marker》经电泳并转膜后的效果图。(B)《自发光Marker》经ECL后的效果图。(C)《双色预染Marker》和《自发光Marker》合并后的彩色效果图。(D)《双色预染Marker》和《自发光Marker》合并后的黑白效果图。实验条件:12% SDS-PAGE胶,一抗为小鼠Anti-Actin抗体,二抗为HRP标记的山羊抗小鼠抗体。泳道1:预染Marker 泳道2:自发光Marker;泳道3:细胞裂解样品。注:《自发光Marker》中的117.52 kDa条带未经质谱鉴定,为理论分子量,别的5个条带均已经过质谱鉴定,为实际分子量。



附录(一)《自发光Marker》质谱图





















































2. 《自发光Marker》质谱图。《自发光Marker》中的117.52 kDa条带未经质谱鉴定,为理论分子量,别的5个条带均已经过质谱鉴定,为实际分子量。本图为5个蛋白质的质谱图。