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《Western Blot专用自发光Marker》

使用说明书（版本PK29）

产品亮点

《Western Blot专用自发光Marker》作用：（1）提供精确的分子量标准；（2）用于监控一抗、二抗和ECL过程；（3）目的条带大小ECL后可以直接比较。

货号

产品名称	货号	规格	价格
《Western Blot专用自发光Marker》	LU205-100	0.5 mL自发光Marker (100次)	￥600

储存条件

本产品在-20 ℃可保存至少3年。

产品原理

《Western Blot专用自发光Marker》含有6个纯化的蛋白质，均含有可被小鼠、兔子和山羊等各类抗体识别的基团，当进行化学发光（ECL）检测时，6个蛋白质由于结合了相应的抗体，也可以发光，从而达到自发光的效果。

自发光Marker发出的光与目的蛋白质条带发的光一样，可以通过X-光胶片曝光或者ECL发光成像仪进行检测。《自发光Marker》可以为Western Blot提供精确的分子量标准（注：6个蛋白质中的5个都经过质谱的鉴定），也可用于监控一抗、二抗和ECL过程。

产品组成

《自发光Marker》：500 μL，含6个可自发光的蛋白质，分子量从23 – 117 kDa。

产品优点

《Western Blot专用自发光Marker》可以为Western Blot提供精确的分子量标准（注：6个蛋白质中的5个都经过质谱的鉴定，为精确分子量），用于监控一抗、二抗和ECL过程。

注：传统预染蛋白质Marker的由于经过了化学修饰的过程，其分子量是不精确的，其误差有可能达到好几个kDa，而自发光Marker由于没有经过化学染色的过程，其分子量是精确的。

使用方法

1.        《自发光Marker》室温融化后可以在SDS-PAGE胶中直接上样。

2.        《自发光Marker》的使用量，一般上5 μL即可。如有必要，也可根据您使用胶的厚度、上样孔的宽度、一抗和二抗的种类、滴度以及ECL液的灵敏度等相关因素进行适当的调整，一般在2-10 μL之间。

       注：（1）ECL液建议使用本公司的《超敏ECL发光液》，使用该ECL液，《自发光Marker》的使用量2 μL就足够。经比较测试：本公司的《超敏ECL发光液》在灵敏度和发光的稳定性方面都比目前市面上大量使用的Millipore ECL液（货号：WBKLS0500）更灵敏和更稳定，价格却更便宜，还可以大大节省自发光Marker和一抗、二抗的用量。详情请见本公司《超敏ECL发光液》说明书。（2）《自发光Marker》上样量过大时可能会有微弱的杂带，可以通过减少上样量来解决。

3.        《自发光Marker》可以与本公司或者别的公司的《预染Marker》一起使用，更有利于全程监控Western Blot所有环节。

         注：（1）《自发光Marker》和《预染Marker》根据您的喜好，即可以分开来上样，也可以在同一个泳道上两种Marker。

（2） 如果同一个泳道上两种Marker时，最好先将两种Marker在离心管中匀混后，再上样，如此操作，Marker的条带会更漂亮。

4.        转膜后，进行正常的封闭、一抗和二抗孵育，最后进行ECL发光检测。

5.        ECL后，可以同时检测到6个自发光条带和目的条带（如图1B所示）。目的条带的大小一目了然。

产品效果

图1. 《双色预染Marker 和自发光Marker套装》实验效果图。（A）《双色预染Marker》经电泳并转膜后的效果图。（B）《自发光Marker》经ECL后的效果图。（C）《双色预染Marker》和《自发光Marker》合并后的彩色效果图。（D）《双色预染Marker》和《自发光Marker》合并后的黑白效果图。实验条件：12% SDS-PAGE胶，一抗为小鼠Anti-Actin抗体，二抗为HRP标记的山羊抗小鼠抗体。泳道1：预染Marker； 泳道2：自发光Marker；泳道3：细胞裂解样品。注：《自发光Marker》中的117.52 kDa条带未经质谱鉴定，为理论分子量，别的5个条带均已经过质谱鉴定，为实际分子量。

附录（一）《自发光Marker》质谱图

图2. 《自发光Marker》质谱图。《自发光Marker》中的117.52 kDa条带未经质谱鉴定，为理论分子量，别的5个条带均已经过质谱鉴定，为实际分子量。本图为5个蛋白质的质谱图。