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《支原体活菌种：猪鼻支原体》使用说明书

（版本211220）

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货号

        MH030

含量

        猪鼻支原体（M.Hyorhinis）甘油菌种：0.1 mL

储存条件

        该产品通过冰袋运输，收到产品后请放于-80 ℃保存。

产品说明

        本猪鼻支原体（Mycoplasma hyorhinis）活菌种是从ATCC引进（ATCC 17981珠）的菌种。

        猪鼻支原体（Mycoplasma hyorhinis）是体外细胞培养中最常见的污染细胞的支原体种类之一，大约占细胞培养中支原体污染的20-50%。

支原体的扩增培养

       取猪鼻支原体（Mycoplasma hyorhinis）活菌种 5 μL ，接种到 10 mL 的含20%小牛血清（已灭活）的支原体液体培养基（含葡萄糖，不含精氨酸，pH值为7.6）中，在37 ℃普通的细菌培养箱，有氧培养。

        培养2-5天后，可以看到接种有Mycoplasma hyorhinis的支原体液体培养基（含葡萄糖，不含精氨酸）与不接菌的对照管相比，其颜色会由初始的鲜红色变成黄色（pH值降低，，如图1所示），说明Mycoplasma hyorhinis培养成功。

         注意：接种后，支原体液体培养基（含葡萄糖，不含精氨酸）的颜色一旦由初始的鲜红色变成黄色后，不能继续培养，否则支原体很容易因pH值太低而死亡。

        变色后的菌液即可用作《发光法支原体检测试剂盒》、《PCR法支原体检测试剂盒》、《一步法恒温支原体检测试剂盒》或《探针法支原体检测试剂盒》的阳性对照。

       也可以将猪鼻支原体（Mycoplasma hyorhinis）活菌种直接接种到含10%血清的哺乳动物细胞培养液中，与细胞共同培养，培养3天后，即可使用该细胞培养上清作为《发光法支原体检测试剂盒》、《PCR法支原体检测试剂盒》、《一步法恒温支原体检测试剂盒》或《探针法支原体检测试剂盒》的阳性对照。注意：如果将支原体接种到哺乳动物细胞培养液中进行扩增培养，必须与细胞共同培养，不能单独培养！

支原体的保存

取上述活化培养后的猪鼻支原体（Mycoplasma hyorhinis），无菌操作加入等体积的已灭菌的20%的甘油（用含0.9%氯化钠的生理盐水配制），分装到冻存管中，冻存在-80℃冰箱作为活的菌种保存。

图1. 将猪鼻支原体（Mycoplasma hyorhinis）接种到支原体液体培养基（含葡萄糖，不含精氨酸，pH值为7.6），有氧培养3天后的结果。（A）为未接种的对照管；（B）为接种猪鼻支原体的实验管。可见：接种有猪鼻支原体的实验管，培养3天后其颜色会由初始的鲜红色变成黄色，而对照管颜色不变。

附录

        本猪鼻支原体菌种与ATCC 17981珠 16S rRNA部分序列比对结果，上面为本猪鼻支原体菌种16S rRNA序列，下面为ATCC 17981珠 16S rRNA序列。可见两者序列100%相同：

本猪鼻支原体菌种测序结果与ATCC菌种序列比对结果: 

结果表明，本菌种与ATCC 17981序列100%相同，而与 ATCC 29052序列只有99%相同。